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TIANSeq直接快速DNA文庫構(gòu)建試劑盒(IIIumina)(NG101)

TIANSeq直接快速DNA文庫構(gòu)建試劑盒(IIIumina)(NG101)

品牌:Watchmaker

貨號:NG101

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商品描述

品牌:Watchmaker

貨號:NG101

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產(chǎn)品簡介

TIANSeq DirectFast Library Kit(Illumina) 是專門針對于Illumina 高通量測序平臺所優(yōu)化的 DNA 文庫構(gòu)建試劑盒。本試劑盒實(shí)現(xiàn)了 DNA 片段化、末端修復(fù)和 3’端 dA 尾添加在一管內(nèi)一步法完成,同時(shí)所得產(chǎn)物無需純化,可直接用于 adapter 的連接。另外,本試劑盒配備的 PCR 擴(kuò)增試劑經(jīng)過專門的優(yōu)化,擴(kuò)增所得 DNA 序列產(chǎn)量高,保真度好、無堿基偏好性。本產(chǎn)品采用一步法的反應(yīng)流程,省去了多步純化步驟,整個(gè)建庫流程僅需 2.5 hr;文庫轉(zhuǎn)化效率更高,可對微量 DNA 樣本進(jìn)行高效的文庫構(gòu)建。


主要特點(diǎn)和優(yōu)點(diǎn)

■ DNA 片段化過程和 PCR 富集過程無明顯堿基偏好性,測序均一度好。

■ 高文庫轉(zhuǎn)化效率, DNA 樣本起始量可低至 1 ng。

■ 一管式酶促反應(yīng),操作簡便,省去多步純化步驟,整個(gè)建庫流程僅需 2.5 hr


應(yīng)用

  • 適用于 Illumina 高通量測序平臺 DNA 文庫構(gòu)建



文庫構(gòu)建流程

實(shí)驗(yàn)結(jié)果



靈活的上樣量和片段處理長度

圖1. 不同反應(yīng)時(shí)間對DNA 片段化效果

使用“TIANSeq DirectFast DNA Library Prep Kit” 對10 ng 和1000 ng DNA 進(jìn)行片段化處理。處理不同時(shí)長的反應(yīng)產(chǎn)物經(jīng)1.8× 磁珠進(jìn)行純化后用于Angilent 2100 分析。




片段化酶與機(jī)械片段化效果比較

圖2. 不同文庫制備方案基因組覆蓋的對比結(jié)果,三種不同GC 含量細(xì)菌基因組DNA 等摩爾混合,100 ng 混合DNA 經(jīng)不同方案制備文庫測序后比較基因組覆蓋度。結(jié)果表明:FEA Module(NG301) 對DNA 的片段化效果與超聲破碎高度一致,均不存在堿基偏好性。

樣本低至1ng建庫效果比較

圖3. 不同文庫制備方案基因組覆蓋的對比結(jié)果,三種不同GC 含量細(xì)菌基因組DNA 等摩爾混合,1 ng 混合DNA 經(jīng)不同方案制備文庫測序后比較基因組覆蓋度。結(jié)果表明:即使低至1 ng 的DNA 上樣量,F(xiàn)EA Module(NG301) 的片段化效果仍然與 超聲破碎方法高度一致,沒有堿基偏好性。


采用PCR free步驟測序結(jié)果比較

圖4. 不同初始量的基因組DNA 使用PCR 或PCR free 的方式進(jìn)行文庫構(gòu)建,*終的基因組覆蓋對比對。結(jié)果表明:使用Fragmentation Module (NG301)試劑及一管式操作和高效的文庫構(gòu)建步驟,無論是否進(jìn)行PCR 富集,所得到的DNA 文庫在片段覆蓋度分布方面均與機(jī)械破碎方法保持高度一致。

文庫構(gòu)建效率與得率統(tǒng)計(jì)

圖5. 不同起始量樣本(1、10、25、50、100、500、1000 ng) 進(jìn)行文庫構(gòu)建后,使用qPCR 對得到的文庫DNA 進(jìn)行定量分析結(jié)果。線性回歸分析表明在廣泛的上樣量范圍內(nèi),文庫得率均呈良好的線性關(guān)系。即使在上樣量低至1 ng 的情況下,文庫構(gòu)建效率也不會降低。

















































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